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很實用的Western Blot實驗流程

2017-02-04 瀏覽次數:3297

什么是WB?

Western Blot中文名稱“蛋白免疫印跡”,是將電泳分離后的細胞或組織總蛋白質從凝膠轉移到固相載體上,而后用特異性抗體檢測某特定抗原的一種蛋白質檢測技術。

 

一.實驗流程:

樣本制備 ---SDS-PAGE電泳---轉膜---封閉---抗體孵育---顯色

 

二.標本類型:

1.細胞培養上清(胞外)

2.細胞和組織裂解物

 

三.組織樣本處理方法:

1.采集標本后,稱取組織凈重,用液氮迅速冷凍保存備用;

2.標本融化后置冰上,加5倍體積冷PBS(可參考文獻加適量蛋白酶抑制劑),低溫勻漿研磨處理;

3.4℃ 6000rpm離心15min,收集上清(注意去掉上層油脂),分裝后一份待檢測,其余冷凍備用;

4. 蛋白定量。

 

 

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